放射免疫分析法（Radioimmunoassay，RIA）是一种用于检测生物样本中微量物质的技术，广泛应用于临床诊断、药物研究、环境监测等领域。其核心原理是利用标记了放射性同位素的抗体与待测抗原进行特异性结合，通过测量结合态和游离态的放射性强度来定量分析抗原的浓度。以下是放射免疫分析法的基本步骤：

1. **样品准备**：首先需要从生物样本中提取待测抗原。这一步骤可能包括蛋白质沉淀、有机溶剂萃取等方法，以确保样品中待测抗原的纯度和稳定性。

2. **标记抗体**：选择特异性针对待测抗原的抗体，并通过化学方法将其与放射性同位素（如碘-125、碘-131等）结合，形成标记抗体。标记过程中需严格控制条件，以确保标记效率和标记物的稳定性。

3. **免疫反应**：将一定量的标记抗体与已知浓度的标准品以及未知浓度的待测样品混合，在一定条件下进行孵育，使标记抗体与抗原充分结合。

4. **分离结合态和游离态**：通过离心、过滤或其他物理化学方法将结合态的复合物与游离态的标记抗体分离。这一过程需要精确控制以避免影响结果准确性。

5. **测量放射性强度**：使用γ计数器或液体闪烁计数器等仪器对分离后的结合态和游离态分别进行放射性强度测量。通常情况下，会同时测量标准品系列和未知样品系列的放射性强度。

6. **计算样品浓度**：根据标准品系列的数据建立标准曲线，利用线性回归等统计方法计算未知样品中待测抗原的浓度。

7. **结果分析与验证**：对实验结果进行详细分析，并与其他检测方法或临床数据对比验证结果的有效性和可靠性。

放射免疫分析法因其高灵敏度、特异性强等特点，在生物医学研究和临床诊断中发挥着重要作用。然而，该技术也存在一定的局限性和潜在风险，如操作复杂、成本较高以及存在辐射污染等问题，在实际应用时需谨慎考虑。